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鈣測量對于許多生物學(xué)研究至關(guān)重要,鈣離子熒光探針腔腸素是進行鈣測量的有效工具,跟著小螢一起看看它是怎么工作的吧。?1.百螢 鈣離子熒光探針腔腸素工作原理水母發(fā)光蛋白復(fù)合物包含22kD的載水母發(fā)光蛋白,分子氧和發(fā)光體腔腸素。當(dāng)三個Ca2 +離子與該配合物結(jié)合時,腔腸素被氧化為腔腸酰胺,并伴有二氧化碳和藍光的釋放。水母發(fā)光蛋白的生物發(fā)光對Ca2 +濃度的大約三次方依賴性,可以在?0.1 μM
無信號1、一抗和二抗不匹配:二抗需和一抗宿主的物種相同(一抗來自鼠,二抗便是抗鼠抗體)。2、沒有足夠的一抗或二抗結(jié)合目標蛋白:使用高濃度抗體。4℃延長孵育時間。(如過夜)3、封閉劑與一抗或二抗有交叉反應(yīng):使用溫和的去污劑,如吐溫-20,或換封閉劑(常用脫脂奶粉、BSA、、明膠)。4、一抗不識別待檢物種的蛋白:參照說明書,對比原序列和蛋白序列以確保抗體和目的蛋白會發(fā)生反應(yīng)。設(shè)置陽性對照。5、蛋白上樣
鬼筆環(huán)肽是鬼筆毒素家族的主要代表,是一種雙環(huán)七肽,是從有毒的死亡帽蘑菇傘形毒蕈中分離出來的。它對F-肌動蛋白亞基之間的凹槽具有很高的親和力。一旦與F-肌動蛋白結(jié)合,鬼筆環(huán)肽就會使單體和長絲的平衡向長絲位置移動,并抑制ATP水解。相互作用通過防止亞基解離來穩(wěn)定肌動蛋白絲,并通過降低臨界濃度促進肌動蛋白聚合。結(jié)果,這些特性使得鬼筆環(huán)肽衍生物成為可視化F-肌動蛋白和細胞骨架網(wǎng)絡(luò)的有用染色劑。本周百螢主要
百螢 檢測細胞功能的探針------Annexin V-Cy3標記
一、百螢 Annexin V-Cy3標記概述:Annexin V-Cy3標記是用于檢測細胞功能的探針,膜聯(lián)蛋白是鈣依賴性磷脂結(jié)合蛋白家族。 它們富含真核生物,屬于參與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的普遍存在的細胞質(zhì)蛋白家族。 膜聯(lián)蛋白V的結(jié)合配偶體是磷脂酰絲酸(PS),其通常保持在細胞膜的內(nèi)葉(細胞質(zhì)側(cè))。 在細胞凋亡中,PS被轉(zhuǎn)移到質(zhì)膜的外部小葉。 磷脂酰絲酸在細胞表面上的出現(xiàn)是細胞凋亡的初始/中間階段的通用指示,并
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